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本発明は、フィーダー細胞およびコンディショニング培養培地を含む接着培養条件で培養された多能性幹細胞から分化した細胞集団における未分化多能性幹細胞の存在を検出する（又は非存在を確認する）方法に関し、第１の胚性幹細胞マーカーを検出する第１の染色、及び第２の胚性幹細胞マーカーを検出する第２の染色を適用することを特徴とする。