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本発明は、ヒト自己再生性内胚葉前駆細胞を作製する方法に関し、(a)ヒト多能性幹細胞をアクチビンＡまたはノーダルを含む無血清培地中で培養する工程、(b)工程(a)の細胞を、アクチビンA、BMP4、VEGF、およびFGF2を含む無血清培地中で培養して胚体内胚葉細胞を作製する工程、(c)工程(b)の胚体内胚葉細胞を洗浄し、予め冷却した基底膜調製物を洗浄した細胞に添加する工程、及び(d)工程(c)で得られた細胞を、無血清培地中にBMP4、VEGF、FGF2、およびEGFを含む浮遊培養物(基底膜調製物を含む)中で培養して、自己再生性内胚葉前駆細胞の増殖を選択的に促進する工程を含む。本発明はさらに、前記方法の後に一定の工程を行う単一ホルモン性膵島ベータ細胞を作製する方法に関する。