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本発明は、ヒトES細胞 及び/又はiPS細胞を以下の工程で培養することを特徴とするインスリン産生細胞の分化誘導方法に関する；(1)ヒトES細胞及び／又はiPS細胞を、(1-1)アクチビン受容体様キナーゼ－4,7の活性剤及びGSK3阻害剤を含む培地で培養し、さらに(1-2)アクチビン受容体様キナーゼ－4,7の活性剤を含む培地で培養する工程、(2)工程(1)で得られた細胞を、ヘッジホッグシグナル伝達阻害剤及びFGFを含む培地で培養する工程、(3)工程(2)で得られた細胞を、レチノイン酸受容体アゴニスト、ヘッジホッグシグナル伝達阻害剤、及びBMPシグナル伝達阻害剤を含む培地で培養する工程、(4)工程(3)で得られた細胞を、TGF-βI型アクチビン受容体様キナーゼ－4,5,7阻害剤、BMPシグナル伝達阻害剤及びプロテインキナーゼＣ活性化因子を含む培地で培養する工程、及び(5)工程(4)で得られた細胞を、ニコチンアミド及びGLP-1受容体アゴニストを含む培地で培養する工程。