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本発明は、ヒト多能性幹細胞から、サイトケラチン15及びCD49fを発現し生着可能なヒトケラチノサイト幹細胞を製造する方法に関し、(a)規定培地中で浮遊培養し、多能性幹細胞の凝集体を形成させる工程、(b) レチノイン酸およびBMP4を含有する開始培地中で浮遊培養し、開始凝集体の形成を促す工程、(c)コレラ毒素およびTGFβR1キナーゼ阻害剤を含有するケラチノサイト前駆体培地中で開始凝集体を培養し、ケラチノサイト前駆細胞を含む細胞集団の形成を促す工程、及び(d) コレラ毒素およびVEGFを含むケラチノサイト幹細胞成熟培地中でケラチノサイト前駆細胞を培養し、生着可能なケラチノサイト幹細胞を含む細胞集団の形成を促す工程を含む。