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本発明は、多能性幹細胞から心室心筋細胞への分化を誘導するための方法に関し、当該方法は、SMAD1/5/8 経路を活性化する作用物質を多能性幹細胞分化の中期（中胚葉細胞または心臓前駆細胞が心筋細胞に分化するとき）に該多能性幹細胞の培養培地に添加するステップを含み、かつ、(i)当該作用物質がBMPファミリーのメンバーを含むか、あるいは(ｉｉ）該多能性幹細胞の培養培地がレチノイン酸もしくはその前駆体を含有せず、該作用物質がレチノイン酸受容体γ（RARγ）のアゴニストを含むことを特徴とする。