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本発明は、多能性幹細胞から小腸上皮様細胞への分化誘導方法に関し、以下の工程を含む；（1）多能性幹細胞を内胚葉細胞に分化誘導する工程、及び（2）前記分化誘導により得られた内胚葉細胞をBIO（6-Bromoindirubin-3'-oxime (GSK-3 Inhibitor IX)）及びDAPT（N-[(3,5-Difluorophenyl)acetyl]-L-alanyl-2-phenyl]glycine-1,1-dimethylethyl ester (γ-secretase inhibitor)）を含む系で培養し、さらにALK5阻害物質、Wnt3a及びEGFを含む系で培養する工程。