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本発明は、哺乳動物由来の多能性幹細胞を分化誘導する方法であって、(a)該多能性幹細胞をメチオニンを含まない多能性幹細胞の未分化維持培地で培養する工程、および(b)工程(a)で培養した多能性幹細胞を、分化誘導培地で培養して分化誘導する工程を含む。本発明において、幹細胞の分化誘導の前に、メチオニンを除去した培地（未分化維持培地）で培養することにより、効率の良い分化誘導が可能になることが見出された。