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本発明は、大規模かつ高効率に多能性幹細胞より心筋細胞を生成するための方法に関し、a）ROCK阻害剤、ミオシンII阻害剤、FGF、またはHGFを含む凝集物形成促進条件下でヒトiPS細胞クローンをインキュベートする工程、b）該クローンの心臓分化に好適な分化因子のレベルを決定する工程、 c）骨形成タンパク質、アクチビンA／ノーダル、VEGF、DKK1、bFGF、IGF、EGFからなる群から選択される該分化因子のレベルを調整した心臓分化培地を取得する工程、 およびd）c）で取得された該心臓分化培地中で該クローンを心筋細胞に分化させる工程を含む。