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本発明は、多能性幹細胞から膵臓ホルモン発現細胞を誘導する方法に関し、以下の工程を含む；(a)多能性幹細胞を胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へと分化させる工程、(b)工程(a)で得た細胞を原始腸管細胞集団へ分化させる工程、（ｃ）工程(b)で得た細胞集団を後部前腸の細胞集団へ分化させる工程、(d)工程（ｃ）で得た細胞集団をCYP26A阻害剤を含む培地で培養し膵内分泌前駆細胞集団へ分化させる工程、(e) 工程(d)で得た細胞集団をBMP阻害剤およびＡＬＫ５阻害剤含む培地で培養し未成熟な膵臓ホルモン発現細胞へ分化させる工程、および(f)工程(e)で得た未成熟な膵臓ホルモン発現細胞をBMP阻害剤、ALK5阻害剤およびビタミンA を含む培地で培養し膵臓ホルモン発現細胞へ分化させる工程。