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本発明は、ヒト羊水由来細胞又はヒト包皮線維芽細胞から多能性幹細胞を作製する方法に関し、SOX2、OCT4、LIN28及びNANOGからなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子をコードする核酸を含む少なくとも１つのレトロウイルスにより、SOX2、OCT4、LIN28及びNANOGをコードする核酸の全てが形質導入された細胞を作製し、該細胞を細胞外マトリックスタンパク質の被覆プレート上で、Rhoキナーゼ阻害剤及びｂFGFを含む培地中で培養する工程を含む。