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本発明は、多能性幹細胞からの色素幹細胞の製造方法に関し、以下の工程を含む；(a) 多能性幹細胞から浮遊培養により胚様体を形成させる工程、(b) 工程(a)により得られた細胞を、紡錘形で黒褐色の顆粒を含有する細胞が出現し始めるまで、メラノサイトへの分化を誘導する条件下で培養する工程、および(c) 工程(b)により得られた細胞を、メラノサイトの維持培養条件下で培養する工程。好ましい形態として、 工程(b)が、多能性幹細胞を、Wntシグナル経路アゴニスト、SCF、ET-3、cAMP誘導剤及びbFGFを含有する培地中で培養することにより行われる場合を含む。