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本発明は、細胞集団の９０％超の細胞がＰＤＸ１及びＮＫＸ６．１を共発現し、かつ膵臓内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団を生成する方法に関し、該方法は、(a)多能性幹細胞集団を胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へ分化させる工程、および(b)得られた細胞集団を、一定の群から選択されるプロテインキナーゼＣ活性化因子およびＢＭＰ阻害因子を含む培地中で、前記膵臓内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へ分化させる工程を含み、生成された細胞は動物に移植された場合にさらにインビボでインスリン分泌細胞に分化する。