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本発明は、ヒトフィーダー細胞層を用いて多能性幹細胞を膵内分泌細胞に分化させるための方法に関し、(a)多能性幹細胞を一定のタンパク質マーカー発現が陰性であり別の一定のタンパク質マーカー発現が陽性である膵臓由来間質細胞を含むヒトフィーダー細胞層上に蒔く工程、および（b）該多能性幹細胞の分化を促進する少なくとも１つの因子で処理する工程を含む。