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本発明は、フィーダー細胞層を使用せず、かつレンチウィルスのトランスフェクション効率を増大させる剤を使用せずに、羊水由来細胞から多能性幹細胞を作製する方法に関し、１）ＳＯＸ２、ＯＣＴ４、ＬＩＮ２８およびＮＡＮＯＧを、レンチウィルスのトランスフェクション効率を増大させる剤を含まない培地中でレンチウィルスによって羊水由来細胞に形質導入する工程、および２）形質導入された細胞をＲｈｏキナーゼ活性阻害剤を添加した培地中でマトリゲルで被膜した組織培養プレート上に移す工程を含む。