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本発明は、成熟した多能性幹細胞由来心筋細胞の取得方法に関し、多能性幹細胞を１０～１４日間分化誘導後、得られた分化誘導細胞を培養器から解離させる際に順に(i)コラゲナーゼタイプＩＩで処理、(ii)コラゲナーゼタイプＩＩとＤＮＡａｓｅＩで同時処理、(iii)細胞分散用バッファーで解離させる工程を含み、さらに該分化誘導細胞から心筋マーカーとしてプリオン陽性かつ未分化マーカーとしてＳＳＥＡ１陰性細胞を分取する工程を含む。