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本発明は、多能性幹細胞富化ヒト歯髄由来細胞の製造方法に関し、該方法は歯髄懸濁物に含まれる歯髄由来細胞を、マイトマイシンＣによって細胞増殖能が抑制されたNIH3T3細胞又は間葉系幹細胞である支持細胞を含んだ支持細胞培養用容器中で、該支持細胞の通過を阻止できる微細孔を有し下側面が該支持細胞と接触しないように支持された膜の上で培養する工程を含む。